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多年來,酵母菌在生物化學、遺傳和分子分析等方面取得了大量的研究成果,已成為生物制藥研究者的模型生物系統(tǒng)和工具。因此,酵母已成為基因表達研究和重組蛋白的常用載體。盡管研究中使用的酵母種類很多,包括Pichia、Hansen和Debali酵母,但酵母是常用的。
傳統(tǒng)的酶法很難從細胞中提取完整的酵母RNA和細胞內(nèi)蛋白。溶菌酶通常是粗制濫造的,含有RNA酶和蛋白酶,不僅破壞細胞壁,而且破壞靶分子。此外,原生質(zhì)體的酶解通常需要添加洗滌劑,這會導致各種蛋白質(zhì)的失活。因此,機械裂解或破壞酵母細胞通常需要釋放小分子。
1、粉碎前的準備:
0.1g細菌(本實驗以0.1g菌體為例);XX鋼珠;研磨機(選用品牌新銳精儀Gd-300);XX研磨罐。
2、磨削加工。
將0.1g細菌與30MLPBS溶液混合,用移液管均勻滴入液氮。收集冷凍的球。頻率調(diào)整到XXHz,振動時間為XXS。取出研磨罐,放入液氮預冷XXS,取出再研磨。
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